Wat is een endotoxinetest?

Wat is een endotoxinetest?

Endotoxinen zijn hydrofobe moleculen die deel uitmaken van het lipopolysacharidecomplex dat het grootste deel van het buitenmembraan van Gram-negatieve bacteriën vormt.Ze komen vrij wanneer de bacteriën afsterven en hun buitenmembranen uiteenvallen.Endotoxinen worden beschouwd als de belangrijkste bijdragers aan de pyrogene respons.En parenterale producten die besmet zijn met pyrogenen kunnen leiden tot de ontwikkeling van koorts, het opwekken van een ontstekingsreactie, shock, orgaanfalen en de dood bij mensen.

Endotoxinentest is de test om endotoxinen van Gram-negatieve bacteriën te detecteren of te kwantificeren.

In eerste instantie worden konijnen ingezet om endotoxinen in farmaceutische producten op te sporen en te kwantificeren.Volgens USP omvat de RPT het monitoren van een verhoging van de temperatuur of koorts na intraveneuze injectie van het geneesmiddel bij konijnen.En 21 CFR 610.13(b) vereist een pyrogeentest op konijnen voor specifieke biologische producten.

In de jaren zestig ontdekten Fredrick Bang en Jack Levin dat amebocyten van de degenkrab zullen stollen in de aanwezigheid van endotoxinen.DeLimulus Amebocyte Lysaat(of Tachypleus Amebocyte Lysate) werd dienovereenkomstig ontwikkeld om de meeste RPT te vervangen.Op USP wordt de LAL-test de bacteriële endotoxinetest (BET) genoemd.En BET kan worden gedaan door gebruik te maken van drie technieken: 1) de gel-clot-techniek;2) de turbidimetrische techniek;3)de chromogene techniek.Vereisten voor de LAL-test omvatten optimale pH, ionsterkte, temperatuur en incubatietijd.

Vergeleken met RPT is BET snel en efficiënt.BET kon RPT echter niet volledig vervangen.Omdat de LAL-test door factoren kan worden verstoord en niet-endotoxine-pyrogenen niet kunnen worden gedetecteerd.